試驗設計

500只AA肉雞隨機分為5組，分別為對照組、抗生素組（基礎飼糧+500mg/kg土霉素鈣）、L-XOS組（基礎飼糧+150mg/kg XOS）、M-XOS組（基礎飼糧+300mg/kg XOS）、H-XOS組（基礎飼糧+450mg/kg XOS）。每組5個(gè)重復，每個(gè)重復20只雞，試驗肉雞營(yíng)養需要參考NRC(1994)和前期研究結果進(jìn)行設計，基礎日糧配方設計見(jiàn)表1。

預試期7d，正式試驗期42d，試驗雞自由采食和飲水。按照常規免疫程序進(jìn)行免疫。飼養期為42d，記錄采食量、體重等數據。第42天，從每個(gè)重復中選取1只接近平均體重的雞進(jìn)行屠宰，每個(gè)處理組屠宰5只，屠宰前禁食12h，翅下靜脈采血4mL，經(jīng)離心機離心分離血清，-80℃冷凍保存。測量并記錄肉雞十二指腸、空腸、回腸的重量、長(cháng)度和腸道pH，取2cm左右十二指腸、空腸、回腸固定在4%多聚甲醛用于H.E.染色，取部分回腸進(jìn)行RT-qPCR試驗檢測腸道屏障相關(guān)基因mRNA的表達。

XOS對生長(cháng)性能的影響見(jiàn)表2。與對照組相比，抗生素組、M-XOS組42d體重顯著(zhù)增加（P<0.05），22~42d、1~42d增重顯著(zhù)增加（P<0.05），22~42d、1~42d料重比顯著(zhù)降低（P<0.05）；與L-XOS、H-XOS組相比，抗生素組的22~42d、1~42d增重顯著(zhù)升高（P<0.05），22~42d、1~42d料重比顯著(zhù)降低（P<0.05）；與L-XOS、H-XOS組相比，M-XOS組22~42d增重顯著(zhù)升高（P<0.05），21~42d料重比顯著(zhù)降低（P<0.05）。

生長(cháng)性能是肉雞實(shí)際生產(chǎn)中常見(jiàn)的量化指標，是評定飼料添加劑效果的重要指標。本研究中抗生素組、M-XOS組42d肉雞體重、22~42d、1~42d增重顯著(zhù)升高，21~42d、1~42d料重比顯著(zhù)降低；表明XOS對肉雞的生長(cháng)性能確實(shí)起到一定的改善效果。同時(shí)，與L-XOS、H-XOS組相比，M-XOS組22-42d增重顯著(zhù)升高，22~42d料重比顯著(zhù)降低，暗示當XOS添加劑量過(guò)高時(shí)反而起到相反的效果。

XOS對肉雞免疫指標的影響見(jiàn)表3。與對照組相比，抗生素組與M-XOS組顯著(zhù)提高了肉雞血清的IgA、IgG水平（P<0.05），顯著(zhù)降低了IL-1β、TNF-α的水平（P<0.05），提高了肉雞血清IgM的水平，但是差異不顯著(zhù)（P>0.05）；與對照組相比，H-XOS組顯著(zhù)提高了肉雞血清IgG水平（P<0.05），L-XOS、H-XOS組顯著(zhù)降低了IL-1β、TNF-α的水平（P<0.05）；與L-XOS、H-XOS組相比，M-XOS組、抗生素組顯著(zhù)降低了IL-1β、TNF-α的水平（P<0.05）。

血清生化指標是重要的健康指標。血清免疫球蛋白是具有已知抗體活性的動(dòng)物來(lái)源的蛋白質(zhì)，通常存在于血液和組織液中，由免疫系統細胞合成以對抗外來(lái)物質(zhì)/抗原。家禽中主要的免疫球蛋白是IgA、IgG和IgM，血清中這3種免疫球蛋白的含量可以代表雞血清免疫球蛋白的總體水平。本研究結果顯示，抗生素與M-XOS顯著(zhù)提高了肉雞的IgA、IgG水平，提高了IgM的水平，但是差異不顯著(zhù)，進(jìn)一步證實(shí)了XOS確實(shí)可能提高肉雞的生產(chǎn)性能。且與L-XOS、H-XOS組相比，M-XOS組IL-1β、TNF-α的水平顯著(zhù)降低，暗示高劑量的XOS反而沒(méi)有中劑量XOS的效果好。

XOS對腸道長(cháng)度和重量的影響見(jiàn)表4?？股亟M與XOS組對肉雞十二指腸、空腸以及回腸的長(cháng)度和重量均沒(méi)有顯著(zhù)影響（P<0.05），M-XOS組和抗生素組可以使十二指腸的長(cháng)度和重量有上升的趨勢，但是差異不顯著(zhù)（P>0.05）。

XOS對腸道pH的影響見(jiàn)表5?？股亟M與XOS組對肉雞十二指腸、空腸的pH均沒(méi)有顯著(zhù)影響，但是M-XOS組和抗生素組顯著(zhù)降低了回腸的pH值（P<0.05）；與H-XOS組相比，M-XOS組顯著(zhù)降低了回腸的pH（P<0.05）。

XOS對十二指腸、空腸、回腸絨毛長(cháng)度、隱窩深度以及腸壁厚度的影響見(jiàn)表6。與對照組、L-XOS組相比，M-XOS組和抗生素組顯著(zhù)升高了回腸的絨毛長(cháng)度和隱窩深度（P<0.05）；但對十二指腸、空腸的絨毛長(cháng)度和隱窩深度以及十二指腸、空腸、回腸的腸壁厚度沒(méi)有顯著(zhù)影響（P＞0.05）。

腸道是動(dòng)物消化吸收的主要場(chǎng)所，腸道的發(fā)育情況對動(dòng)物健康和生長(cháng)情況非常重要。腸道pH值被認為是影響腸道消化吸收能力的關(guān)鍵，研究認為酸性環(huán)境能夠促進(jìn)機體對日糧中營(yíng)養物質(zhì)的消化吸收，同時(shí)也有益于一些有益菌的生長(cháng)，抑制一些有害菌的繁殖。腸道絨毛長(cháng)度以及隱窩深度對于維持腸道屏障的完整性至關(guān)重要，腸道絨毛結構的發(fā)育對于提高機體的營(yíng)養吸收能力起積極影響。本研究結果顯示，抗生素與XOS對肉雞十二指腸、空腸的pH均沒(méi)有顯著(zhù)影響，但是與對照組相比，M-XOS組和抗生素組顯著(zhù)降低了回腸的pH以及回腸的絨毛長(cháng)度和隱窩深度，暗示XOS可能對肉雞的消化吸收能力起到一定的改善效果，且XOS主要在消化道下段起作用。

XOS對腸道緊密連接蛋白表達的影響見(jiàn)圖1。與對照組相比，抗生素組顯著(zhù)升高了Occludin、Claudin-1和ZO-1mRNA的表達水平（P<0.05）；M-XOS組顯著(zhù)升高了Claudin-1和ZO-1 mRNA的表達水平（P<0.05），M-XOS組使Occludin mRNA的表達水平有上升的趨勢，但是差異不顯著(zhù)（P>0.05），L-XOS、H-XOS組較對照組Claudin-1表達水平顯著(zhù)上調（P>0.05），而抗生素組與L-XOS、H-XOS組相比，Occludin、Claudin-1mRNA表達水平顯著(zhù)上升（P>0.05），而M-XOS組與L-XOS、H-XOS組相比，Claudin-1mRNA表達水平顯著(zhù)升高（P>0.05）。

腸上皮的主要功能是形成屏障以防止腔內抗原或病原體進(jìn)入黏膜并與免疫系統接觸，從而實(shí)現腸內穩態(tài)。當腸道屏障被破壞時(shí)，會(huì )引發(fā)一系列的疾病，因此，腸道屏障完整性對于機體健康來(lái)說(shuō)至關(guān)重要。物理屏障是有害物質(zhì)進(jìn)入腸黏膜的第一道屏障，它是由一層柱狀上皮細胞和細胞間緊密連接蛋白(TJ)組成的完整的上皮結構，它在腸道屏障中有重要的位置。Claudins是TJ的結構骨架，Occludin是第一個(gè)被發(fā)現的組成TJ的最主要成員，而ZO-1是支撐TJ結構的基礎，可以影響腸道結構的通透性。當TJ被破壞時(shí)，腸道的通透性增加，抗原可通過(guò)腸道屏障，危及腸道健康。ZO-1、Claudins和Occludin的表達水平通常被用來(lái)評估腸通透性和腸道完整性好壞的重要依據。

本研究中，抗生素組顯著(zhù)升高了Occludin、Claudin-1和ZO-1mRNA表達水平，M-XOS組顯著(zhù)升高了Claudin-1和Mucin-2mRNA表達水平，M-XOS組使Occludin mRNA表達水平有上升的趨勢，但是差異不顯著(zhù)，提示XOS確實(shí)可能對腸道屏障產(chǎn)生積極影響。

添加X(jué)OS可以顯著(zhù)升高42日齡肉雞體重、22~42d、1~42d增重，顯著(zhù)降低22~42d、1~42d料重比，提高肉雞的生長(cháng)性能。添加X(jué)OS可以顯著(zhù)提高IgA、IgG水平，顯著(zhù)降低IL-1β、TNF-α的水平，增強肉雞的免疫功能。添加X(jué)OS可以增加回腸的重量、Claudin-1和Mucin-2 mRNA表達水平以及回腸的絨毛長(cháng)度和隱窩深度，顯著(zhù)降低回腸的pH值，從而改善腸道健康。在本試驗條件下，XOS在肉雞飼糧中適宜的添加劑量為300 mg/kg，且XOS和抗生素對肉雞的影響效果比較接近，具有替抗的潛質(zhì)。