試驗設計 菌株 長(cháng)雙歧桿菌(Bifidobacterium longum 1.2186)、青春雙歧桿菌(Bifidobacterium adolescentis 1.2190)、嬰 兒 雙 歧 桿 菌 ( Bifidobacterium infantis 1.1853)、植 物 乳 桿 菌 ( Lactobacillus plantarum 1.557)均購自中國普通微生物菌種保藏管理中心;鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus 6133)購自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心。 菌株的活化培養 取48 h乳桿菌及雙歧桿菌培養物,按5%的比例分別轉接至新鮮的MRS和BS液體培養基中,37℃厭氧培養24 h,取出于4℃冰箱保存備用。 低聚木糖對乳桿菌生長(cháng)的影響 在MRS培養基中分別加入0、0.2%、0.5%、1%低聚木糖,分為四組,其中不加低聚木糖的作為對照組,每組做三個(gè)重復,分裝于100 mL 輸液瓶中,121℃滅菌30 min,分別加入已培養好的2種乳桿菌菌液2 mL,37℃厭氧培養24 h后取出,測活菌數(平板計數法)。 低聚木糖對雙歧桿菌生長(cháng)的影響 在BS培養基中分別加入0、0.2%、0.5%、1%低聚木糖,分為四組,其中不加低聚木糖的作為對照組,每組做三個(gè)重復,分裝于100 mL 輸液瓶中,121℃滅菌30 min,分別加入已培養好的3種雙歧桿菌菌液2 mL,37℃厭氧培養24 h后取出,測活菌數(平板計數法)。 低聚木糖對人體腸道菌群的影響 采用GAM培養基為基礎培養基(未加葡萄糖),對照組1加1%葡萄糖,對照組2不加葡萄糖,試驗組加0.5%低聚木糖。每組設3個(gè)平行樣,每個(gè)樣裝250 mL,共計分裝9個(gè)100 mL輸液瓶。加塞并插上針頭,然后115℃滅菌20 min,滅菌后拔出針頭。取新鮮糞便10 g加入100 mL稀釋液中充分混合,分別取上清液1 mL加入9個(gè)樣品中培養,37℃ 發(fā)酵。檢測發(fā)酵0、6、12、24 h發(fā)酵液中雙歧桿菌、乳酸桿菌、腸桿菌、腸球菌的數量(平板計數法)及發(fā)酵液的pH值。 試驗結果 (1)低聚木糖對乳桿菌生長(cháng)的影響 由表1可知,低聚木糖在不同濃度下,對2株乳桿菌生長(cháng)的增殖促進(jìn)作用有所不同,對鼠李糖乳桿菌的增殖促進(jìn)作用明顯優(yōu)于植物乳桿菌;并且對鼠李糖乳桿菌的增殖作用在 1%和2%的濃度下與對照組差異顯著(zhù)(P<0.05),對植物乳桿菌的增殖作用只1%的濃度下差異顯著(zhù)(P<0.05)。 (2)低聚木糖對雙歧桿菌生長(cháng)的影響 由表2可知,不同添加量的低聚木糖對3種雙歧桿菌生長(cháng)的促進(jìn)作用有所不同,對長(cháng)雙歧桿菌和青春雙歧桿菌的促進(jìn)作用在1%的濃度下與對照組差異顯著(zhù)(P<0.05),0.5%和2%的低聚木糖對其生長(cháng)無(wú)明顯影響;而對嬰兒雙歧桿菌的促進(jìn)效果皆不明顯。 (3)低聚木糖對人體腸道菌群的影響 由表3可知,對大腸桿菌來(lái)說(shuō),隨著(zhù)發(fā)酵時(shí)間的延長(cháng),對照組與試驗組都是先升高后降低;在發(fā)酵12 h時(shí),試驗組明顯低于對照組1和對照組2,且差異極顯著(zhù)(P<0.01),對照組1與對照組2差異不顯著(zhù)(P>0.05);發(fā)酵24 h時(shí),試驗組明顯低于對照組1和對照組2,且差異極顯著(zhù)(P<0. 01),對照組1低于對照組2,差異顯著(zhù)(P<0.05)。 由表3可知,對腸球菌來(lái)說(shuō),隨著(zhù)發(fā)酵時(shí)間的延長(cháng),試驗組與對照組皆呈升高的趨勢;在發(fā)酵6 h和12 h時(shí),對照組2低于對照組1和試驗組,且差異顯著(zhù)(P<0.05);在發(fā)酵24 h時(shí),試驗組與對照組1、對照組2都達到了同一個(gè)數量級(108 )上,且差異不顯著(zhù)(P>0. 05)。 由表3可知,對乳桿菌來(lái)說(shuō),隨著(zhù)發(fā)酵時(shí)間的延長(cháng),試驗組與對照組皆呈上升趨勢,在0 h 時(shí),三組皆未檢測到乳桿菌;在6 h時(shí),對照組1與試驗組的乳桿菌數達到101-102,而對照組2未檢測到乳桿菌,并且試驗組的乳桿菌數明顯高于對照組1和對照組2,與對照組1差異顯著(zhù)(P<0.05),與對照組2差異極顯著(zhù)(P<0.01),對照組1與對照組2差異極顯著(zhù)(P<0. 01);在12 h時(shí),試驗組的活菌數皆高于對照組1和對照組2,但與對照組1差異不顯著(zhù)(P>0.05),與對照組2差異極顯著(zhù)(P<0.01),且對照組1與對照組2差異也極顯著(zhù)(P<0.01);在24 h 時(shí),試驗組與對照組1、對照組2差異均極顯著(zhù)(P<0.01),對照組1與對照組2差異不顯著(zhù)(P>0.05)。 由表3可知,對雙歧桿菌來(lái)說(shuō),隨著(zhù)發(fā)酵時(shí)間的延長(cháng),試驗組與對照組皆呈上升趨勢,在0 h時(shí),試驗組與對照組1、對照組2差異不顯著(zhù)(P>0.05),在6 h時(shí),試驗組皆高于對照組,且差異極顯著(zhù)(P<0.01),但在12 h、24 h,3組之間差異均不顯著(zhù)(P>0.05)。對 pH值來(lái)說(shuō):接種腸道菌群后發(fā)酵液的初始pH值均較高,隨著(zhù)發(fā)酵時(shí)間的延長(cháng),發(fā)酵液的 pH值均呈下降趨勢。0-12 h,pH降低較快,至發(fā)酵后期pH值變化較平緩。葡萄糖培養基的pH值下降速度最快,最低降至4. 24,其次為低聚木糖組為4.62,不加糖的對照組為 5. 08,培養基pH值的降低是因為細菌代謝多糖產(chǎn)生乳酸和短鏈脂肪酸所致。 試驗結論 1%的低聚木糖對植物乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、長(cháng)雙歧桿菌和青春雙歧桿菌有明顯的增殖作用;此外,低聚木糖能促進(jìn)人體腸道中乳桿菌和雙歧桿菌的增殖,抑制大腸桿菌的生長(cháng),且對腸球菌無(wú)明顯的增殖效果,表明低聚木糖對腸道菌群有較好的調節效果。 參考資料: 徐海燕,辛國芹,曹銀生,武香玉,汪孟娟,谷巍.低聚木糖對益生菌及人腸道菌群的影響[J].藥學(xué)研究, 2013, 32(09):500-503. |